Flödescytometriska analyser kan användas för att studera cellpopulationer genom infärgning av cellspecifika markörer med fluorokromkonjugerade antikroppar.  Vid isolering och frysförvaring av perifera mononukleära celler (PBMC) uppstår risken att cellmarkörer och cellpopulationer påverkas och därmed inte återger ett representativt resultat i relation till färska helblodsprover. Syftet med studien var att undersöka om isolering och frysförvaring påverkar subpopulationer av cytotoxiska T-celler. Den procentuella fördelningen av cytotoxiska (CD8+) T-celler och cytotoxiska T-celler med uttryck av markörerna; CD25, FOXP3, CD127, CD122, CD26, CD45RA, CD39, CD197 (CCR7) samt perforin jämfördes i helblod, färskisolerade- och frysförvarade (10 dygn) PBMC, från 10 blodgivare på gruppnivå. Under studiens genomförande observerades ett antal riskfaktorer, däribland användning av subjektiv manuell gating, erfarenhetsbrist av bedömning av flödescytometriska resultat, samt eventuella typ I och II fel.  Studiens resultat visade att subpopulationer av cytotoxiska T-celler generellt inte påverkades av isolering- och frysförvaring (10 dygn) av PBMC. Däremot observerades en minskad procentuell andel cytotoxiska (CD8+) T-celler och CD279+ cytotoxiska T-celler efter isolering av PBMC. Vidare ökade den procentuella andelen CD197+Perforin+ cytotoxiska T-celler efter 10 dygns frysförvaring. För att bekräfta studiens resultat och säkerställa att resultaten är reproducerbara rekommenderas ytterligare studier.

Cell populations can be studied by staining cell-specific markers with fluorochrome-conjugated antibodies and subsequent flow cytometric analysis. Isolation and cryopreservation of peripheral blood mononuclear cells (PBMC) can induce alterations in cell populations and the expression of cellular markers, thus causing PBMC not to represent fresh whole blood samples. The aim was to investigate whether isolation and cryopreservation of PBMC affects subpopulations of cytotoxic T cells. Following flow cytometric analysis, the percentage of cytotoxic (CD8+) T cells and cytotoxic T cells expressing the markers; CD25, FOXP3, CD127, CD122, CD26, CD45RA, CD39, CD197 (CCR7), perforin in whole blood,freshly isolated- and cryopreserved (10 days) PBMC, from 10 blood donors, were compared at grouplevel. During the study certain risk factors were observed, including the use of subjective manual gating, lack of experience in assessing flow cytometric results, and hypothetical type I and II errors. According to the results, isolation and cryopreservation (10 days) of PBMC generally did not affect subsets ofcytotoxic (CD8+) T-cells. However, the percentage of cytotoxic (CD8+) T-cells and CD279+ cytotoxic Tcells decreased following isolation of PBMC. Furthermore, the percentage of CD197+Perforin+ cytotoxic T-cells increased following 10 days of cryopreservation. To confirm the results and ensure reproducible results, additional studies are recommended.